钩端螺旋体外膜脂蛋白LipL32的重组表达及纯化

摘要

目的:构建L32-pQE32重组质粒,诱导表达重组钩端螺旋体外膜脂蛋白LipL32,对重组蛋白进行纯化.方法:采用PCR法从钩端螺旋体DNA中获取编码LipL32的基因片段,构建重组克隆载体pGEM-T/L32和表达载体L32-pQE32,转化受体菌E.coli DH5α和E.coli M15,IPTG诱导表达重组LipL32蛋白.Ni-NTA亲和层析纯化重组LipL32蛋白.结果: 扩增出约750 bp的LipL32成熟蛋白基因,LipL32基因插入pQE32表达载体,表达产物6个组氨酸与LipL32蛋白的融合蛋白相对分子质量约为31 000,与预期大小一致.Western印迹显示能与钩体抗血清特异结合.结论:LipL32蛋白能在大肠杆菌中表达,Ni-NTA亲和层析可有效纯化重组LipL32蛋白,重组LipL32蛋白具有结合活性.