以牛胶原凝胶为支架构建人工真皮的研究

摘要

目的:制备成纤维细胞胶原凝胶(即真皮替代物),以研究细胞的生长、分化、增生及与真表皮间的相互作用,为研制大面积创面覆盖物--复合皮奠定基础.方法:①酶消化法培养胎儿成纤维细胞; ②制备细胞胶原凝胶,分为Ca-gel和Cf-gel组,接种后于不同时间观察两组细胞的形态变化和胶原凝胶的收缩情况;③细胞计数;④SEM观测胶原凝胶的表面是否有成纤维细胞附着;⑤HE染色.结果:①成纤维细胞形态及增殖情况:成纤维细胞胶原凝胶形成后呈半透明状,可出现较明显的细胞增殖,并可见凝胶收缩现象,但Ca-gel组较小;人工真皮质地与颜色近似真皮组织,有一定的弹性和抗拉性,不易脆.②细胞计数法所得两组生长曲线基本相似.Ca-gel和Cf-gel组细胞均具有典型的细胞增殖现象,Cf-gel组细胞在后期的增殖略快于Ca-gel组.③扫描显微镜下可见到凝胶表面有梭形的成纤维细胞出现,且成纤维细胞紧密贴附于凝胶上.④HE染色可见胶原呈较均一的淡红色网状分布,成纤维细胞分布于胶原凝胶内部和表面.结论:①培养好的细胞凝胶称之为真皮替代物,是进行皮肤器官型培养和制作复合皮的关键与基础,并可与培养的人工表皮膜片混合移植,起到促进表皮细胞的生长黏附和加速创面愈合的作用.②成纤维细胞在胶原凝胶中有着活跃的生物学特性,因此在研究成纤维细胞在创面愈合中的生物学行为以及在皮肤组织工程学的研究中,以胶原凝胶为支架的三维培养系统较脱细胞基质系统更为科学.