Bax反义硫代脱氧寡核苷酸的体外抗辐射效应研究

摘要

目的:Bcl-2/Bax蛋白比值降低是辐射所致细胞凋亡启动的检查点.本研究拟用Bax反义核酸干预Bax基因的表达,提高Bcl-2/Bax蛋白比值,抑制辐射所致凋亡,促进细胞存活.方法:人胚肺成纤维细胞(HELF)和小鼠受γ射线照射后,立即用Bax反义脱氧寡核苷酸处理HELF细胞和小鼠骨髓细胞6?h(终浓度均为100?nmol/L),用MTT法、SRB法和小鼠骨髓中性粒细胞-巨噬细胞系祖细胞(CFU-GM)集落形成法,确定细胞的存活状况.用RT-PCR方法和流式细胞仪检测Bax mRNA的表达状况、细胞周期的变化,分析其作用机制.结果:HELF细胞的存活率分别增加24.4%(MTT法,P<0.01)和12.8%(SRB法,P<0.01);骨髓细胞处理组CFU-GM集落形成数量远高于照射对照(72±17 vs 13±6,P<0.01);RT-PCR检测显示,处理组的目标条带和内标条带的灰度比值(Bax/β-actin)低于对照组(分别为43.9%和68.6%);流式细胞仪检测表明,处理组总S期细胞的比例高于对照组,分别为24.2%和7.7%,提示处理组细胞内Bax mRNA拷贝数量低于对照组,细胞增殖活动较强.结论:靶向Bax mRNA的反义硫代脱氧寡核苷酸,能够促进γ射线辐射后细胞的存活,其机制与破坏靶mRNA分子,继而造成Bax蛋白表达减少,抑制凋亡启动并促进细胞增殖活动有关.