A型产气荚膜梭菌α毒素基因的克隆及高效表达

摘要

目的:实现产气荚膜梭菌α毒素(Clostridium perfringens alpha toxin,CPa)基因的克隆与表达.方法:用PCR技术从A型产气荚膜梭菌中扩增出CPa基因,克隆到原核表达载体pQE30中,构建了重组质粒pQE30-CPa,转化E.coli M15获得了CPa的高效表达.结果:序列测定和双酶切表明,CPa基因正确插入载体.序列分析发现CPa基因与GenBank中的4种CPa基因相似率为76.7%～99.9%.工程菌裂解液经SDS-PAGE分析显示在相对分子质量43?000处有一条表达很强的蛋白区带,与CPa相对分子质量相符,约占菌体总蛋白的62.88%,主要以包涵体形式存在.免疫印迹结果表明, 表达的重组CPa蛋白同抗CPa血清有特异性结合.结论:为进一步研究CPa重组疫苗和制备CPa的特异性抗体奠定了基础.