产气荚膜梭菌B型C58-1株β1毒素基因的克隆表达

摘要

利用PCR技术,从B型产气荚膜梭菌中国标准株C58-1株扩增出β1毒素基因,连接pMD18-T载体筛选阳性克隆,然后用限制性核酸内切酶BamH Ⅰ和Sal Ⅰ对其进行酶切,回收927 bp的β1毒素基因片段,将其定向克隆到载体pET-32a中,获得重组质粒pETβ927.将pETβ927转化至受体菌BL21 (DE3)中,其表达产物经His-TrapFF预装柱纯化、SDS-PAGE检测目的蛋白大小和分布及Western blotting检测其反应原性.结果表明,完整的β1毒素基因大小为1 011 bp,与GenBank发表的B型和C型产气荚膜梭菌β1毒素蛋白序列同源性达99.4％以上;SDS-PAGE结果显示重组目的蛋白在大肠杆菌中成功表达,融合蛋白大小为54 ku,在超声波裂解上清和包涵体中均有分布,但以包涵体为主.Western blotting检测结果显示表达的重组蛋白可与特异性血清抗体发生免疫反应,表明β1毒素蛋白具有较好的反应原性.