新型抗EGFR人源化抗体基因的构建和表达

摘要

目的:构建并表达进一步人源化且效果显著增强的抗EGFR抗体.方法:通过计算机辅助设计的结果,合成新型抗EGFR抗体的轻链和重链可变区序列,拼接成完整的轻链和重链基因并克隆入pIRES双表达载体.瞬时转染293T细胞,用rProtein A亲和层析柱从细胞培养上清中纯化抗体,并进行SDS-PAGE和免疫印迹鉴定.采用Biacore3000技术检测抗体结合抗原的能力;细胞侵袭实验初步检测抗体的功能.结果:成功构建3种不同突变体表达载体C2、C3和C5,纯化的抗体在还原SDS-PAGE中表现为相对分子质量约为25×10~3和50×10~3两条带;免疫印迹分析表明,该人源化抗体可与羊抗人IgG特异性结合.Biacore3000实验结果表明,C3抗体与抗原具有良好亲和活性(亲和力为6.13×10~(-10) mol/L);细胞侵袭实验结果表明,C2和C3抗体对肿瘤细胞生长迁移均具有一定的抑制作用.结论: 成功构建、表达了3种抗EGFR人源化抗体C2、C3和C5,其中C3具有良好的抗原结合能力和抑制肿瘤细胞生长迁移能力.