人EGFR基因真核表达质粒的构建及其在293细胞中的表达

摘要

目的 :构建人表皮生长因子(EGFR)基因真核表达系统,拟为EGFR靶向腺病毒准备包装细胞。方法:用RT-PCR法,从人A431细胞中逆转录出EGFR基因cDNA,插入到pcDNA3.1(+)质粒中,拟构建EGFR真核表达载体,经测序证实。用脂质体将重组质粒转染293细胞,经G418筛选获得稳定表达EGFR重组克隆,用Western blot鉴定转染细胞中EGFR基因的表达。结果:经限制性内切酶酶切及测序结果分析证实EGFR基因已插入重组质粒。Western blot方法证实转基因293细胞中存在人EGFR基因的表达。结论:成功构建的人EGFR/pcDNA3.1(+)真核表达系统能够在293细胞稳定表达。