致病疫霉拮抗菌株B25-Ⅰ-3的鉴定及其次级代谢产物

摘要

[背景]粘细菌是一类具有社会性行为的高等原核生物,能产生丰富、多样、新颖的具有生物活性的次级代谢产物,具有很大的研究开发价值.[目的]从土壤样品中筛选出对致病疫-(Phytophthora infestans)具有拮抗作用的粘细菌,并对其次级代谢产物进行研究.[方法]对分离到的一株拮抗P.infestans菌株,结合形态观察和16S rRNA基因序列分析确定其分类地位,并通过单因素分析与正交优化相结合的方法对菌株的发酵参数进行研究.采用滤纸片法对其浓缩发酵液中活性物质的稳定性及抗菌活性进行检测,并通过薄层色谱法(thin layer chromatography,TLC)与高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)等初步分离后,将具有抗P.infestans活性的组分利用液相色谱-质谱联用技术(HPLC-MS)进行检测,最后通过离体叶片法测定活性物质对马铃薯晚疫病的防病作用.[结果]从土壤样品中分离得到的菌株B25-Ⅰ-3对P.infestans表现出较强的拮抗活性,经鉴定为橙色粘球菌(Myxococcus fulvus).其拮抗P.infestans的活性物质主要存在于胞外,产活性物质的最优发酵条件为:摇床转速180 r/min,接种量10％,培养温度30℃,发酵周期7d.该菌株产生的活性物质耐受蛋白酶K以及紫外线与自然光照射,对温度耐受性极强,而且易于在低温下保存,对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠杆菌(Escherichia coli)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、向日葵核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)均有不同程度的抑制作用.其对P.infestans的拮抗组分中含有N-(3-氨基-2-羟丙基)-N-甲基硫酸二酰胺[N-(3-amino-2-hydroxypropyl)-N-methylsulfuric diamide]与甲基(2R)-2-叠氮基-3-羟基-2-甲基丙酸酯[methyl(2R)-2-azido-3-hydroxyl-2-methylpropanoate],该活性物质能明显抑制P.infestans侵染马铃薯叶片且对不同品种的叶片均无损伤作用.[结论]研究为M.fulvus B25-Ⅰ-3活性物质的分离鉴定及抗马铃薯晚疫病生物农药的研发提供了基础数据.