禽流感病毒H9N2血凝素基因和神经氨酸酶因在大肠杆菌中的表达

摘要

克隆、表达和鉴定禽流感病毒H9N2 HA,NA基因序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础.在成功克隆禽流感病毒H9N2全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pET32a(+)上,全基因序列克隆到表达载体pGEX4T-1上,构建了重组表达质粒pET32a(+)/HA(截短)、pET32a(+)/NA(截短)、pGEX4T-1/HA、pGEX4T-1/NA,转化大肠杆菌BL21/rosetta,IPTG诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱和GSTrap 4B亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western Blotring和ELISA方法检测其抗原性.结果重组蛋白在大肠杆菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示其相对分子质量与预计大小一致.ELISA和Western Blotting实验证实,重组蛋白具有良好的抗原性.本研究成功克隆和表达了禽流感病毒H9N2 HA、NA基因序列.为禽流感病毒H9N2诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究奠定了基础.