假单胞菌株M18gacA基因的克隆、表达及蛋白纯化

摘要

GacA是GacS/A双元调控系统的一个组分,克隆假单胞菌株M18中的gacA基因.测序结果同Pseudomonas sp.PAO1比较,该基因2个碱基的改变未引起氨基酸的改变.将该基因克隆到表达质粒pET28b(+)中,将重组质粒经热激转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达.表达产物经金属螯合层析柱纯化,蛋白纯度约为98%,质谱鉴定证明纯化的蛋白为GaeA蛋白.CD谱分析GacA包含了4%α-helix,48%β-sheet和48%无规则卷曲.GacA蛋白的获得为进一步研究其晶体结构、生物学性能以及GacS/A双元调控系统奠定了基础.