人单核细胞系中HIV-1前病毒转录调节新型研究模型的建立

摘要

[目的]抗反转录病毒疗法(ART)能够有效控制人免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus-1,HIV-1)的复制,但是不能将其完全清除.至2012年底,全球仍有3 500万HIV-1感染者,同年约160万人死于艾滋病(Acquired immune deficiency syndrome,AIDS)及其相关疾病.HIV-1感染难以根治的主要原因之一是机体内HIV-1潜伏储存库(Reservoir)的存在.HIV-1潜伏储存库主要由CD4+T细胞和单核巨噬细胞构成,与CD4+T细胞相比,目前研究者对单核巨噬系细胞中HIV-1病毒复制机制尚不明了,且缺乏适宜的研究体系.因此,为探讨单核细胞活化或分化信号对HIV-1复制的影响,我们建立了旨在研究HIV-1前病毒转录调控机制的人单核巨噬细胞系模型.[方法]构建env区域移码突变和nef区域携带EGFP或NanoLuc报告基因的HIV-1 NLnGFP-Kp或NLnNanoLuc-Kp重组病毒,分别感染2种人单核细胞系THP-1或U937细胞.通过有限稀释法制备单克隆细胞系,利用流式细胞术或NanoLuc荧光素酶活性分析检测报告基因的表达.筛选EGFP或NanoLuc阴性表达的细胞克隆,经激活剂佛波酯(Phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)刺激后鉴定潜伏感染的细胞克隆.[结果]研究中鉴定了4个HIV-1潜伏感染的细胞克隆.其中2个是表达EGFP的THP-1克隆,2个是以NanoLuc为报告基因的U937克隆.这些克隆在PMA刺激处理后皆有报告基因的表达,而在恒态条件下未检测到报告基因的表达.[结论]成功建立了4个HIV-1潜伏感染的人单核细胞系克隆,该模型有助于理解单核巨噬系细胞的HIV-1病毒复制机制,可能成为进一步研究HIV-1前病毒转录调控机制的有力工具.