疏绵状嗜热丝孢菌外切β-葡聚糖酶的基因克隆与酶学特征

摘要

[目的]疏绵状嗜热丝孢菌是一种嗜热丝状真菌,具有合成与分泌多种耐热酶的能力,从中找寻酶活高、耐热性能优良的β-葡聚糖酶.[方法]对疏绵状嗜热丝孢菌其中一个外切β-葡聚糖酶的编码基因glnB进行克隆,并在毕赤酵母GS115中表达.[结果]在摇瓶水平上重组菌的产酶活为11.5 U/mL,重组酶在SDS-PAGE中的大小约为48 kD.重组GlnB最适作用温度为65℃,最适作用pH为5.0;在低于50℃或pH 3.0-10.0之间具有良好稳定性.重组酶水解海带三糖,首先生成单糖和二糖,延长酶作用时间,可以进一步将其中的二糖部分水解为单糖.[结论]疏绵状嗜热丝孢菌来源的重组酶GlnB为外切p-葡聚糖酶,具有较好的耐热性能和pH稳定性.