丙型肝炎病毒E1E2蛋白原核表达载体的构建及表达产物的鉴定

摘要

目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)包膜糖蛋白(E1E2)基因的原核表达载体,为研究HCV E1E2蛋白属性及基因免疫奠定基础.方法:设计HCV E1E2区基因上、下游引物,分别引入BglⅡ及EcoRI酶切位点,以含有HCV H株基因序列的质粒pBRTM/HCV1-3011为模板,通过PCR 扩增获得HCV E1E2区基因片段,将其克隆入原核表达载体pRSET A,然后通过酶切和序列测定对其进行鉴定;将此表达载体转化入表达菌BL21(DE3)pLySs诱导表达,并采用SDS-PAGE对表达产物进行鉴定.结果:经酶切及序列测定分析表明,成功地构建了重组原核表达载体pRSETA- HCV E1E2;SDS-PAGE显示目的蛋白大量表达,且呈非溶状态. 结论:HCV E1E2融合蛋白可以在大肠杆菌中大量表达,为HCV E1E2蛋白的制备及基因疫苗的研制奠定了基础.