耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因检测的LAMP方法建立

摘要

目的:探讨环介导等温扩增技术(LAMP)检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA) mecA特异性基因的可行性和可靠性.方法:建立LAMP反应体系,优化反应条件,进行灵敏度和特异性试验.结果:LAMP反应检测mecA基因的最佳引物组为引物组2+环引物1,最佳反应温度为62℃,LAMP检测mecA基因的最低限为14.7 pg/μl,PCR检测mecA基因的最低限为147 pg/μl(引物量与LAMP一致),敏感性较PCR高10倍.LAMP检测mecA基因的特异度为100％,假阳性率为15％,假阴性率为0.结论:LAMP是一种操作简单、检测灵敏度和特异度高的扩增方法,仅靠检测mecA基因来鉴别MRSA假阳性率高,需结合金黄色葡萄球菌特异nuc基因同时扩增鉴定效果最好.