癌基因CTTN表达Cortactin蛋白及其变异体磷酸化状态下与细胞蛋白Dynamin相互作用分析

摘要

目的:探讨Cortactin的氨基端序列在磷酸化介导的蛋白相互作用中的功能.方法:设计表达标签为GST的氨基端缺失的Cortactin突变体,纯化突变体蛋白,以及全长Cortactin蛋白,同时纯化His标签的细胞发动蛋白Dynamin,采用Src磷酸化Cortactin蛋白,并采用pull-down分析观察与Dynamin的相互作用.结果:成功表达和纯化Cortactin的1-80氨基酸(Cort△80)缺失、1-349缺失的Cortactin突变体(Cort△349),以及全长Cortactin (Cort WT)和Dynamin.Pull-down分析结果表明:与磷酸化的野生型Cortactin蛋白比较,氨基端缺失的Cortactin蛋白在磷酸化后与Dvnamin的结合作用减弱.结论:实验提示Cortactin分子的氨基端是Arp2/3与actin结合的重要结构域其参与肌动蛋白聚合的过程,对于磷酸化信号的正常传导是不可或缺的部分.