丙型肝炎病毒NS4A抗独特型人源单链可变区抗体的筛选与鉴定

摘要

为探索新型治疗方法,制备抗丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS4A的抗独特型人源单链可变区抗体(抗-Id scFv),采用噬菌体表面展示技术,将抗HCV NS4A单克隆抗体固相包被于Nunc板,应用半合成的人源单链可变区抗体文库技术,从噬菌体单链可变区抗体库中经过5轮"吸附-洗脱-扩增"筛选过程,随机挑选82个克隆,利用酶联免疫吸附法(ELISA)、交叉反应和竞争抑制实验,对其进行免疫学检测和鉴定,获得与HCV NS4A单克隆抗体结合活性较强的抗-Id scFv阳性克隆,并对HCV NS4A特异性抗-Id scFv的编码基因进行序列测定分析.结果,经过筛选82个克隆中有40株克隆ELISA的吸光度(A450nm)值较高,将这些噬菌体上清与牛血清白蛋白(BSA)进行交叉反应,确定其中有7株交叉反应较弱,结合2次ELISA重复实验的A值及竞争抑制实验结果,最后确定1株阳性克隆.提取质粒,进行DNA序列测定,DNA为789bp.本实验结果提示,用噬菌体抗体库技术能够成功地获得抗HCVNS4A的抗-Id scFv,为开展用抗-Id scFv防治丙型肝炎的研究创造了条件.