鼻咽癌人源抗独特型单链抗体的制备及筛选

摘要

背景与目的:抗独特型抗体作为肿瘤抗原替代物可用于肿瘤治疗,这已在临床试验中得到证实.但由于目前所使用的抗独特型抗体多为鼠源性,用于人体可产生人抗鼠抗体反应,从而影响疗效.本实验拟构建噬菌体人源抗独特型抗体库,并从中筛选出能模拟鼻咽癌相关抗原的β型抗独特型单链抗体scFv(Ab2βscFv),以解决鼠源性抗独特型抗体用于临床所产生的人抗鼠抗体反应.方法:体外致敏并用EB病毒(Epstein-Barr vims,EBV)转化鼻咽癌患者的外周血单个核细胞(peripheralblood mononuclear cell,PBMC),用RT-PCR分别扩增VH和VL基因并连接成scFv基因,将scFv基因与载体fUSE5连接后,转化大肠杆菌MC1061,构建噬菌体呈现型scFv库.在用单抗FC2对文库进行4轮筛选后,用SandwichELISA和结合抑制法从中筛选出β型Ab2 scFv.结果:用单抗FC2体外致敏并经EBV转化的10例鼻咽癌患者的PBMC中,8例有鼻咽癌抗独特型抗体产生.经PCR分别扩增出5种VH(γ、μ)和7种VL(κ、λ)基因,经连接组成14种scFv基因.在与载体连接后,导入大肠杆菌MC1061,得到库容为1.5×108的初级噬菌体抗独特型抗体库.经富集筛选后,从中随机挑取270个克隆进行ELISA筛选,得到91个Ab2 scFv单克隆,阳性率为33.7%.再用结合抑制法从中初步筛选出5个可能为β型的Ab2 scFv.结论:联合应用体外致敏、EBV转化及噬菌体呈现技术构建噬菌体抗独特型抗体库,并从中筛选p型Ab2 scFv是可行的,这为进一步用Ab2β scFv制备肿瘤疫苗奠定了基础.