应用噬菌体展示技术筛选乙型肝炎病毒核心启动子结合蛋白

摘要

目的通过筛选乙型肝炎病毒(HBV)核心启动子(core promoter)结合蛋白,为HBV复制机制的研究探索新的途径.方法应用噬菌体表面展示技术,以HBV核心启动子的聚合酶链反应产物作为固相筛选分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行5轮 "吸附-洗脱-扩增"的筛选过程,经噬斑的PCR扩增后,构建克隆载体,最后对所筛选克隆进行DNA序列分析和同源性搜索.结果噬菌体经富集后,从随机筛选的20个克隆中得到6个阳性克隆,成功构建了克隆载体.序列测定后经过同源性搜索,确定了和HBV核心启动子结合的肝细胞蛋白--羧肽酶N(CPN).结论用噬菌体人肝cDNA文库筛选得到HBV核心启动子的结合蛋白,分析了该蛋白的编码基因,为进一步研究HBV的复制机制创造了新的途径.