聚凝胺增强Ror2重组腺病毒感染K562细胞效应的研究

摘要

目的 探索应用聚凝胺(polybrene)试剂增强Ror2重组腺病毒对K562细胞转染效率的技术.方法 在K562细胞中分别加入0～12μl Ror2重组腺病毒,摸索最佳重组腺病毒用量;同时加入0～5μg/ml polybrene和最佳重组腺病毒用量,培养1～3d后,在荧光显微镜下计数,对比加入polybrene前后被感染的细胞数.台盼蓝染色观察重组腺病毒引起K562细胞死亡的情况.采用RT-PCR和Western blotting检测Ror2基因的表达情况.结果 Polybrene浓度为3μg/ml和重组腺病毒8μl时,感染效果最佳,对细胞生长影响较小,实验组感染效果是对照组的17倍;加入polybrene后,外源性Ror2mRNA和蛋白表达水平均明显增高.结论 Polybrene能显著增强重组腺病毒感染K562细胞的作用,并能高效表达外源性Ror2基因,该法简便、价廉、有效,是血液疾病分子生物学研究的一个良好策略.