miR-155对HBV蛋白表达的抑制作用及机制

摘要

目的 观察miR-155对SOCS1 mRNA及蛋白水平的影响,探究miR-155对HBsAg、HBeAg表达的抑制作用.方法 从HepG2.2.15细胞中提取基因组,经PCR扩增得到miR-155前体序列,纯化并连接入pmR-mCherry载体,构建重组质粒pmiR-155,经去内毒素后转染至HepG2.2.15细胞.将细胞分为重组组(转染pmiR-155质粒)、空载组(转染pmR-mCherry质粒)、转染试剂组、空白组.采用荧光实时定量PCR检测各组细胞内miR-155的表达,RT-PCR检测各组细胞SOCS1 mRNA的表达,Western blotting检测各组细胞SOCS1蛋白的表达,ELISA检测各组细胞HBsAg、HBeAg的表达.结果 荧光实时定量PCR结果显示,以空白组细胞内miR-155的表达量为基准,重组组miR-155表达量(519.43±52.10)明显高于空载组(24.24±16.70)及转染试剂组(35.04±26.09,P＜0.05);RT-PCR结果显示,重组组SOCS1 mRNA表达量(0.63±0.91)显著低于空白组(P＜0.05);Western blotting结果显示,重组组SOCS1蛋白表达量显著低于空白组.以空白组的表达量为基准,重组组HBsAg和HBeAg蛋白表达的抑制率分别为55.62％±3.77％和47.87％±2.46％(P＜0.01).结论 过表达的miR-155可抑制细胞内SOCS1和HBV蛋白的表达.