内质网应激前列腺癌细胞通过STAT3信号途径 促进巨噬细胞M2极化的研究

摘要

目的探讨前列腺癌细胞内质网应激相关外泌体能否通过STAT3调控巨噬细胞M2极化。方法以有无毒胡萝卜素(TG)刺激,将前列腺癌细胞(PC3)细胞分为TG组和Con组。TG组分别以不同浓度TG同样时间和同样浓度TG不同时间刺激PC3细胞,通过观察ERS标志蛋白GRP78的表达,确定最佳刺激浓度与时间;Western blot检测Con组和TG组外泌体标志蛋白CD63和TSG101表达,透射电子显微镜鉴定外泌体;激光共聚焦显微镜观察巨噬细胞摄取外泌体;以Con组和TG组外泌体刺激巨噬细胞分为M-Con组和M-TG组,化学发光法检测M-TG组和M-Con组巨噬细胞炎症因子IL-1β、IL-6、IL-10与TNF-α表达情况;Western blot检测M-TG组和M-Con组巨噬细胞PD-L1表达及STAT3通路蛋白表达。结果以TG刺激PC3细胞,结果显示当以3μmol/L的TG刺激PC3细胞24 h,可明显升高GRP78蛋白的表达,可以构建较好的前列腺癌细胞ERS模型。Western blot及透视电镜结果证实成功分离PC3外泌体,且TG组外泌体表达CD63与TSG101多于Con组(P<0.05);激光共聚焦显微镜显示,外泌体能够被巨噬细胞所吞噬;化学发光结果显示,M-TG组分泌的炎症因子较M-Con组多(P<0.05),能够完成巨噬细胞的M2极化;与M-Con组比较,M-TG组能增加巨噬细胞PD-L1蛋白表达,并且激活巨噬细胞STAT3通路(P<0.05)。结论内质网应激的前列腺癌细胞可能通过释放外泌体,激活巨噬细胞STAT3通路,上调巨噬细胞PD-L1蛋白表达,促进巨噬细胞M2极化。