乙肝病毒X基因真核表达质粒及细胞模型的建立

摘要

采用聚合酶链反应(PCR)方法扩增HBV X基因,定向亚克隆入真核表达载体pRc/CMV2,构建重组质粒pCMV/X;采用脂质体法转染QSG7701细胞,筛选阳性细胞克隆;RT-PCR法检测HBV X mRNA的表达情况,Western blotting法鉴定HBx蛋白的表达.结果表明,构建的真核重组表达质粒pCMV/X中包含有完整的HBV X基因片断,pCMV/X转染的QSG7701细胞中有HBV X mRNA及HBx蛋白的稳定表达.成功建立了HBV X稳定转染的细胞系,为进一步探讨HBx在HCC的发生发展过程中所起的作用,提供了一个有价值的细胞模型.