CYP3A4基因原核表达质粒构建与诱导表达

摘要

以质粒pCWNF14为模板,采用PCR技术扩增出CYP3A4基因,并将其接入pET-22b(+)、pET-28b(+)和pET-32a(+)载体中,经PCR测序鉴定后,转化Rosetta(DE3)2pLysS细菌,并用IPTG诱导表达.采用考马斯亮蓝染色的方法检测重组蛋白表达,3个表达重组质粒中,只有pET-32a(+)-CYP3A4可以表达目的蛋白;在低浓度IPTG(50 μmol/L)诱导6 h,所表达的CYP3A4蛋白约占细菌总蛋白的40%,且该蛋白不溶于8 mol/L的尿素,而溶于去污剂10 mmol/L 3-((3-Cholamidopropyl)dimethylammonio propanesulfonic acid(CHAPS))和0.3% lauroyl sarcosine(SKL).成功地使CYP3A4基因在原核系统中高效表达.