CAT为报告基因的铜绿假单胞菌启动子文库的建立及初步鉴定

摘要

以CAT (chloramphenicol acetyltransferase,CAT)为报告基因,构建pCAT2启动子探针载体从绿脓杆菌基因文库中筛选启动子.Sau3A Ⅰ酶切铜绿假单胞菌的基因组,回收(500～1 500 bp)片段并与pCAT2载体连接构建铜绿假单胞菌的基因组文库,PCR鉴定文库的多样性,利用氯霉素(10 μg/mL)和卡那霉素(50 μg/mL)双抗平板筛选了16株阳性菌株,并用PCR、测序、NCBI比对进行鉴定.构建的基因文库的库容量可达50 000个,覆盖基因全长的3.5倍,插入率达90％,具有较强的随机性.采用双抗平板进行启动子的筛选,筛选效率高达96％.获得了绿脓杆菌基因组中的9个启动子,同源性达99％以上,并对其活性进行初步鉴定,为铜绿假单胞菌基因表达调控的进一步研究奠定基础.