不同离心力对B16-F10细胞胞外微囊泡尺度、RNA和蛋白成分的影响

摘要

分析不同离心力对胞外微囊泡尺度、RNA和蛋白成分的影响.在分离纯化小鼠黑色素瘤B16-F10细胞胞外微囊泡过程中,采用12 000×g、100 000×g两种离心力提纯,利用纳米颗粒跟踪分析法分析微囊泡的尺度分布,透射电镜观察微囊泡超微结构,Western-blot鉴定微囊泡蛋白特征,BCA法分析微囊泡内容蛋白含量,毛细管电泳分析微囊泡RNA的性质和水平.结果显示,12 000×g组的平均粒径为233±93.5nm,100 000×g纽的平均粒径为175±74 nm(P＜0.05) 12 000×g组微囊泡的蛋白浓度为3.942±0.427g/L,100 000×g组微囊泡的蛋白浓度为2.428±0.113g/L (P＜0.01),并表达exosome特异性蛋白Tsg101蛋白;12 000×g组微囊泡的RNA总量为22.662 0 mg/L,在258 nt时达到最高,100 000×g组微囊泡的RNA总量为3.280 1 mg/L,在283 nt时达到最高(P＜0.05).因此,微囊泡尺度与离心力相关,不同尺度微囊泡所含蛋白、RNA不同.