Ⅱ型肺泡细胞特异表达SARS冠状病毒核衣壳蛋白转基因小鼠的建立

摘要

目的:建立Ⅱ型肺泡细胞特异表达SARS冠状病毒(SARS-CoV)核衣壳蛋白(N蛋白)的转基因小鼠.方法:用分子克隆的方法构建包括肺表面活性蛋白A(SP-A)启动子、SARS-CoV N蛋白基因、β-半乳糖苷酶(LacZ)报告基因和人生长激素(hGH)polyA的转基因载体pSP-A-N.以显微注射的方法将8.3kb的转基因片段引入小鼠受精卵.通过PCR、Southern印迹和LacZ染色检测子代小鼠中转基因的整合及表达.结果:共注射952枚受精卵,移植至42只假孕母小鼠的输卵管中发育,获得子代小鼠128只,经PCR、Southern印迹鉴定,其中11只小鼠基因组上整合有SARS-CoV N蛋白基因,整合率为8.6%.鉴定结果显示,11只转基因首建者小鼠中有1只表达外源基因并能正常传代.LacZ染色结果表明N蛋白基因在转基因小鼠Ⅱ型肺上皮细胞中特异表达.结论:成功构建了Ⅱ型肺泡细胞特异表达SARS-CoV N蛋白的转基因小鼠,为深入研究该基因的病理生理学效应奠定了基础.