小鼠精胺氧化酶的原核表达与鉴定

摘要

目的:原核表达和分离纯化小鼠精胺氧化酶(SMO).方法:采用RT-PCR法从小鼠胚胎干细胞(ES细胞)RNA中克隆小鼠SMO cDNA,构建SMO原核表达质粒并转染大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导,将表达的小鼠SMO重组蛋白在变性条件下经Ni-NTA树脂亲和层析纯化和透析复性.结果:在大肠杆菌中高表达出小鼠SMO重组蛋白;纯化并透析复性后的重组SMO具备快速氧化特异性底物精胺的酶活性.结论:建立了原核表达和纯化有活性小鼠SMO的实验方法.