甲基营养菌MP688甲醇脱氢酶基因mpq1818的敲除及功能研究

摘要

目的:研究甲醇脱氢酶基因mpq1818在甲基营养菌MP688生长代谢中的作用.方法:利用同源重组原理构建中间为庆大霉素抗性基因Gmr、两侧mpq1818基因上下游序列同源的敲除载体pAK0-up-Gmr-down,接合转移导入MP688,通过庆大霉素抗性和组合PCR方法筛选基因敲除菌,并检测其生长、甲醇脱氢酶活性、甲醇利用及吡咯喹啉醌(PQQ)生物合成能力等方面的差异.结果:抗性和PCR验证显示mpq1818缺失株构建成功;与野生菌相比,缺失株的甲醇脱氢酶活力及利用甲醇的能力降低,而且菌株的生长和PQQ产量也有显著下降.结论:基因mpq1818的缺失影响菌株前期生长与PQQ合成.