Optiprep连续密度梯度离心方法的建立

摘要

目的:试验不同条件,优化Optiprep密度梯度离心方法,建立最佳的Optiprep连续密度梯度,为纯化病毒提供良好的参数.方法:试验不同的旋转角度、重复次数、离心时间,以及用不同浓度的Optiprep制备连续密度梯度等条件,摸索制备连续密度梯度的最佳方案,将此最佳方案应用于纯化丙肝病毒(HCV),并通过qRT-PCR验证纯化效果.结果:通过各种条件的摸索,确立了制备连续密度梯度的最佳方案,即制备10％～40％ Optiprep连续密度梯度,在旋转角度为85°时,1号程序设置为30 r/min离心5 s,2号程序设置为0 r/min 15 s,重复1～2程序10次.将此程序用于纯化HCV,得到了较好的纯化效果.结论:建立了制备Optiprep连续密度梯度离心的方法,为进一步提高病毒的纯化效果提供了参数.