骨形成蛋白10成熟肽在大肠杆菌中的表达纯化及活性分析

摘要

目的:以生物制备骨形成蛋白10(BMP10)为目标,研究BMP10成熟肽在大肠杆菌中的表达及活性.方法:以人源BMP10成熟肽基因为模板,PCR获得N端带有组氨酸标签(6×His)的融合基因6×His-mBMP10,构建pET28a/mBMP 10表达载体;热击转染大肠杆菌BL21 (DE3)菌株,卡那霉素抗性筛选获得重组表达菌株BL21/pET28a-6×HismBMP10,IPTG诱导表达后利用SDS-PAGE电泳、Western印迹对蛋白进行分析;超声波破碎菌体,收集包涵体,镍柱亲和层析纯化获得电泳纯目的蛋白;透析复性后,非还原SDS-PAGE检验目标蛋白的二聚体形成;通过体外细胞实验检测蛋白活性.结果:纯化得到纯度90％以上的mBMP10,复性后二聚体得率约为40％;活性实验测得P19细胞的Smad6蛋白表达上调3倍左右.结论:通过大肠杆菌表达体系获得具有生物活性的BMP10,为后续作用机理研究奠定了实验基础.