人vasorin蛋白胞外结构域单克隆抗体的纯化及应用

摘要

目的:纯化人vasorin(VASN)蛋白胞外结构域的单克隆抗体并鉴定.方法:用表达人VASN蛋白胞外结构域单克隆抗体的杂交瘤细胞免疫小鼠,收集腹水,纯化抗体;ELISA检测单抗的特异性和亲和力,Western印迹、免疫共沉淀、细胞免疫荧光等实验检测单抗的特异性与可能的用途.结果:纯化获得2株抗VASN胞外结构域单抗V20和V21,ELISA结果显示二者均特异性强、亲和力高;Western印迹显示2株单抗均可结合HepG2细胞中的VASN蛋白,以V20为佳;免疫共沉淀实验结果显示V21能够钓取HepG2细胞中的VASN蛋白及细胞培养上清中的分泌型VASN;免疫荧光实验结果显示V21能与HepG2细胞的VASN蛋白结合.结论:纯化获得2株抗人VASN胞外结构域单抗,为进一步研究VASN蛋白的生物学功能提供了实验工具.