sRP技术在微量蛋白质组学分析中的应用

摘要

目的:发展一种适用于微量临床样本的简单而高效的预分离方法,实现深度覆盖蛋白质组学分析的目的.方法:以H1975细胞系和胃黏膜活检组织等复杂样本为研究对象,比较基于高pH反相色谱微柱(sRP)技术在不同浓度梯度洗脱时的蛋白鉴定数目、蛋白定性与定量研究的重复性及不同组分间的肽段预分离效果,并将sRP技术初步运用到微量胃黏膜活检组织的蛋白质组学分析中,进一步注释鉴定的胃黏膜蛋白的生物学功能.结果:单个复杂样本蛋白鉴定的覆盖深度达到7500左右,时间缩短到8h之内;在生物学重复性研究中,蛋白定性检测的重复率在90％以上,无标定量检测的相关系数R2则达到0.97;各组分之间的肽段预分离效果很好,最大的重复率也只有11.6％;在胃黏膜组学分析中,累积鉴定到9000多个非冗余蛋白,实现了对人类胃黏膜蛋白质组的深度覆盖.结论:sRP技术操作简单且重复性好,联合高通量质谱技术,实现了对微量临床样品的深度覆盖蛋白质组学分析.