肾癌缺氧诱导因子2小干扰RNA表达载体的构建及筛选

摘要

目的:构建肾癌缺氧诱导因子2(HIF-2)小干扰RNA真核表达载体.并研究其对肾癌786-0细胞中HIF-2蛋白表达的影响.方法:根据GenBank数据库提供的HIF-2基因核苷酸序列,选择设计双链小干扰RNA,合成HIF-2 RNAi片段No 1、No 2、No 3和对照片段,将RNAi片段定向克隆于pSilencer 2.1-U6 neo真核表达载体,转化感受态菌.挑取阳性载体克隆,DNA测序进行鉴定;培养人肾癌786-0细胞,在脂质体的介导下分别将No 1、No 2、No 3和埘照片段重组载体转染人人肾癌786-0细胞,并设未转染组,Western Blot法检测各载体对肾癌786-0细胞中HIF-2蛋白表达的影响.结果:构建的HIF-2 RNAi真核表达载体经DNA测序证实与设计完全一致,转染肾癌786-0细胞24 h后,No 1组、No 2组和No 3组HIF-2蛋白表达水平降低(分别为0.05±0.00、0.11±0.01、0.15±0.01),与未转染组(0.22±0.02)和对照组(0.21±0.01)相比,差异有统计学意义(F=83.85,P<0.05);未转染和对照组相比差异无统计学意义(P>0.05).结论:成功构建人肾癌HIF-2RNAi真核细胞表达载体,并可有效干扰肾癌786-0细胞中HIF-2蛋白的表达.