一株尖孢镰刀菌细胞色素P450氧化酶基因的克隆及生物信息学分析

摘要

目的:克隆一株能高效转化合成屈螺酮的重要中间体(7α,15α-二羟基DHEA)的尖孢镰刀菌参与反应的关键酶细胞色素P450氧化酶(CYP)基因CYP6003A1。方法:根据尖孢镰刀菌转录组得到CYP基因,自主设计引物,运用Trizol法提取DHEA诱导48 h的尖孢镰刀菌的总RNA,通过PCR扩增尖孢镰刀菌CYP基因并进行基因测序;运用生物信息学分析得到的c DNA序列。结果:成功扩增出全长3 459 bp的c DNA片段,将CYP6003A1基因的氨基酸序列通过NCBI上的BLAST进行在线比对,对照结果显示与CYP6003A1相似度前10个基因有3个是CYP基因,其余均是与CYP基因相关的基因。CYP6003A1基因生物信息学分析结果显示,该基因片段编码691个氨基酸的多肽。结论:从尖孢镰刀菌中成功克隆了CYP6003A1基因并进行了生物信息学分析。