柱前衍生化RP-HPLC法测定L-叔亮氨酸含量

摘要

以2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖异硫氰酸酯(GITC)为手性衍生化试剂,建立一种反相高效液相色谱测定L-叔亮氨酸的方法.以GITC为衍生化试剂对L-叔亮氨酸进行衍生化,优化衍生化试剂用量和衍生化时间等反应条件.使用岛津C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)分离衍生化产物,流动相为V(甲醇)∶V(磷酸盐)=58∶42的缓冲溶液(pH=2.8),流速为0.6 mL/min,检测波长为254 nm,柱温30℃,进样量10 μL,结果表明叔亮氨酸两个对映异构体的衍生化产物分离良好,在0.2～1.0 mmol/L范围内呈现良好的线性关系(r=0.999 6).该方法准确可靠,重现性好,适用于L-叔亮氨酸的含量测定.