氧化型二硫苏糖醇对兔肌肌酸激酶的构象和活性的影响

摘要

采用利用内源荧光、1-苯氨基萘-8-磺酸(ANS)荧光、酶活性的测定以及动力学分析等手段,研究肌酸激酶在氧化型的二硫基苏糖醇(DTT)溶液中的结构与活性的变化.结果表明:随着氧化型DTT浓度的增加,肌酸激酶的活性逐渐丧失,直至完全失活,并伴随着构象的变化.肌酸激酶起初微小的结构变化就会导致酶活性的迅速丧失,而且其的失活先于明显可测的整体构象变化,酶分子的活性部位处于柔性区域内.另外,随着氧化型DTT浓度的提高,肌酸激酶的内源荧光发射峰位明显地红移,外源ANS荧光强度显著增强,即酶分子的疏水面加大,该结果暗示了酶蛋白的构象发生了改变.动力学分析表明,氧化型DTT对肌酸激酶的氧化过程是一个慢的可逆抑制过程,其反应的表观速率常数A的大小与氧化型DTT的浓度无关,因此是非络合型的.