乳糖诱导对幽门螺杆菌UreB、HpaA和大肠杆菌LTKA63、LTB重组蛋白表达的影响

摘要

目的 :探讨乳糖诱导幽门螺杆菌尿素酶 B亚单位 (ure B)、黏附因子 (hpa A)和大肠杆菌肠毒素 B亚单位(lt B)、A亚单位突变体 6 3(lt KA6 3)重组基因表达的效果及最佳表达条件。方法 :采用 BIO- RAD凝胶图象分析系统测定表达的目的重组蛋白产量。采用 SDS- PAGE检测不同乳糖浓度、诱导时间和温度对不同生长阶段工程菌重组蛋白表达量的影响 ,并与异丙基硫代半乳糖苷 (isopropyl- β- D- thiogalactoside,IPTG)比较。结果 :乳糖较 IPTG更为有效地诱导 r Hpa A、r Ure B、r LTB、r L TKA6 3的表达。 37℃诱导的目的重组蛋白表达量明显高于 2 8℃。r Hpa A表达的最佳条件为起始菌液 OD60 0 值 0 .8、5 0 g/L乳糖 ,诱导 4 h;r Ure B和 r LTB均为起始菌液 OD60 0 值 1.2、10 0 g/L乳糖 ,诱导 5 h;r LTKA6 3为起始菌液 OD60 0 值 0 .8、10 0 g/L乳糖 ,诱导 4 h。结论 :乳糖较 IPTG更有效地诱导上述重组基因表达目的蛋白 ,且无毒和廉价 ,为幽门螺杆菌基因工程疫苗工业化生产奠定了有利的基础。