培养大鼠海马神经元树突发育的活细胞成像和量化分析

摘要

目的:采用活细胞成像法测量培养海马神经元的树突生长、分支复杂程度和树突丝的运动性,以及定量分析树突树发育的形态学特征.方法:出生后第1天进行海马神经元培养,于第5天转染绿荧光蛋白(GFP)标记的纤维型肌动蛋白(GFP-F-Actin)和定位在膜上的GFP(F-GFP),观察培养第7～14天树突的发育情况并进行量化分析.结果:培养第7～9天可以观察到高密度的树突丝活跃的运动,树突丝的平均密度分别为(10.78±3.78)个/100 μm、(10.68±2.96)个/100 μm、(9.99±3.67)个/100 μm(P＞0.05),有(30.18±14.03)%到(87.36±20.88)%的树突丝运动活跃(P＜0.001);第7～14天树突树的总长度从(410.74±185.98)μm增长为(1 238.21±418.32)μm(P＜0.001),树突树的总分支数从(18.93±7.23)支增加为(33.60±10.46)支(P＜0.001);培养第14天树突棘的密度为(37.17±6.46)个/100 μm.结论:结合荧光蛋白转染和活细胞成像的方法,可动态、连续地观察,并定量分析发育过程中树突丝、树突树和树突棘的形态学特征,是体外观察神经元发育的理想方法.