虎斑乌贼神经肽sCAP基因克隆与表达分析

摘要

小心激肽(small cardioactive peptides,sCAP)是刺激心脏运动、牵引肌肉收缩、刺激输卵管收缩、增强后肠的收缩以及参与生物蜕皮的神经肽,开展虎斑乌贼sCAP及其生理功能研究具有重要意义,为其种质资源保护和开发奠定一定理论基础.虎斑乌贼sCAP基因(简称SpsCAP,Genbank登录号MN852577)cDNA全长666 bp,包括109 bp的5'-UTR和296 bp 3'-UTR,预测的开放阅读框(ORF)为261 bp,编码86个氨基酸,分子量似W)为9.3 kD,等电点(pI)为8.52.预测的信号肽位于1号到20号氨基酸之间,该蛋白含有跨膜区结构,预测的二级结构含有33.72％的延伸链和66.28％的无规则卷曲,亲疏水性分析显示为亲水性蛋白.同源性氨基酸序列比对发现虎斑乌贼与曼氏无针乌贼的同一性最高,其次是商乌贼;构建系统进化树分析发现,虎斑乌贼sCAP基因的进化关系与曼氏无针乌贼和商乌贼最近,并且与软体动物聚为一支.组织表达分析显示,在虎斑乌贼所有组织中均检测到SpsCAP的mRNA,且视叶组织中表达量最高,其次是脑组织,显著高于其他组织(P＜0.05);在雄性与雌性乌贼的视叶组织表达量存在显著性差异,且雄性乌贼的相对表达量是雌性乌贼的4倍.