从调控TNKS2/APC蛋白探讨培土生金法对非小细胞肺癌转移干预的体外研究

摘要

[目的]基于培土生金理论探讨经方黄土汤含药血清通过调控端锚聚合酶2(tankyrase 2,TNKS2)/腺瘤样息肉病(adenomatous polyposis coli,APC)蛋白抑制非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)转移的作用机制.[方法]采用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)筛选出人肺癌细胞株A549、PC9、H125、H647细胞中的TNKS2高表达细胞系H647以及低表达细胞系A549,再利用慢病毒构建A549 TNKS2过表达细胞系以及H647 TNKS2干扰细胞系.选取体质量为200g的雄性SD大鼠,以浓度为7.8g.mL-1的黄土汤水煎剂灌胃,1周后分离含药血清.通过细胞划痕实验检测经TNKS2基因表达变化、黄土汤含药血清干预以及黄土汤含药血清联合TNKS2基因表达变化干预后,H647和A549细胞迁移能力变化.将细胞分成黄土汤含药血清+H647siRNA干扰组、H647siRNA干扰组、黄土汤含药血清+A549过表达组及A549过表达组4组,以Western blot法检测TNKS2蛋白和APC蛋白表达变化.[结果]A549、H125、PC9以及H647细胞随着细胞恶性程度增加,qPCR结果显示其TNKS2基因表达量随之增加.H647细胞TNKS2基因表达明显高于A549、H125、PC9细胞系,差异有统计学意义(P＜0.001,P＜0.001,P＜0.01);A549和H125细胞TNKS2基因表达差异无统计学意义(P＞0.05).划痕试验结果显示TNKS2基因高表达细胞系迁移能力较强,黄土汤含药血清能够抑制A549、H647细胞迁移能力(P＜0.01,P＜0.001),也能抑制经TNKS2基因作用后的A549、H647细胞迁移能力(P＜0.05,P＜0.001).Western blot结果显示,黄土汤含药血清能抑制TNKS2基因过表达的A549细胞中TNKS2表达(P＜0.05),调高经TNKS2基因干扰的H647细胞中APC表达(P＜0.05).[结论]培土生金法对恶性程度不同的NSCLC细胞转移均有抑制作用,可通过下调TNKS2表达或诱导抑癌蛋白APC表达,从而影响NSCLC的发生、发展、转移.