黑曲霉尿酸氧化酶基因克隆及在大肠杆菌中的表达

摘要

目的：为大量生产医用尿酸氧化酶，对一个黑曲霉菌株的尿酸氧化酶基因进行了克隆和在大肠杆菌中的异源表达。方法：基因测序结果显示，克隆的黑曲霉尿酸氧化酶基因全长为909bp，编码302个氨基酸残基。SDS-PAGE和非变性电泳分析结果显示，单体酶分子量在35～37kDa之间；表达过程中酶蛋白分子自我组装成4聚体蛋白，聚合体蛋白的表观分子量为140～150kDa。结果：酶蛋白在大肠杆菌细胞液中表达，产物几乎完全以水溶状态存在，最佳溶解pH为8．0。最佳酶促反应温度为35℃。经过诱导表达后的菌体，按照1：20（质量／体积）比例重悬于最优缓冲液中，进行超声波破碎后，粗酶液活力为67．69IU／mL，比活性为47．00IU／mg。结论：提供了一个微生物来源尿酸氧化酶新的获取方法。