二甲双胍对人急性髓系白血病KG1a细胞增殖和凋亡的影响及其机制

摘要

目的 探讨二甲双胍对人急性髓系白血病KG1a细胞增殖和凋亡的影响及其机制.方法 取处于对数生长期KG1a细胞,用含体积分数10％胎牛血清的RPMI 1640培养基调整细胞悬液至终浓度为8×107 L-1,以每孔100μL细胞悬液接种到96孔板中,随机分为对照组及2、4、6、8、10、12、16、24、32 mmol·L-1二甲双胍组,分别加入终浓度0、2、4、6、8、10、12、16、24、32 mmol·L-1二甲双胍,使用细胞计数试剂盒检测细胞存活率.另取处于对数生长期KG1a细胞,随机分为对照组、2 mmol·L-1二甲双胍组和6 mmol·L-1二甲双胍组,分别加入终浓度0、2、6 mmol·L-1二甲双胍干预KG1a细胞,采用流式细胞术检测KG1a细胞凋亡率,免疫印迹法检测KG1a细胞中腺苷酸活化蛋白激酶α(AMPKα)、蛋白激酶B(AKT)、核糖体蛋白S6激酶(P70S6K)、4E-结合蛋白-1(4EBP-1)、Thr172位点磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶[pAMPK(Thr172)]、Ser473位点磷酸化蛋白激酶B[pAKT(Ser473)]、Thr37/46位点磷酸化核糖体蛋白S6激酶[pP70S6K(Thr37/46)]、Thr389位点磷酸化4E-结合蛋白-1[p4EBP-1(Thr389)]相对表达量.结果 与对照组比较,2、4、6、8、10、12、16、24、32 mmol·L-1二甲双胍组KG1a细胞存活率显著减低(P<0.05);且各浓度二甲双胍组KG1a细胞的存活率呈浓度依赖性下降(P<0.05);二甲双胍对KG1a细胞的半数抑制浓度为6 mmol·L-1.2 mmol·L-1二甲双胍组和6 mmol·L-1二甲双胍组KG1a细胞凋亡率高于对照组(P<0.05),6 mmol·L-1二甲双胍组KG1a细胞的凋亡率高于2 mmol·L-1二甲双胍组(P<0.05).2 mmol·L-1二甲双胍组和6 mmol·L-1二甲双胍组KG1a细胞中AKT、AMPKα、P70S6K、4EBP-1及P70S6K(Thr37/46)、p-4EBP-1(Thr389p)蛋白相对表达量显著低于对照组(P<0.05),AMPKα(Thr172p)、p-AKT(Ser473)蛋白相对表达量显著高于对照组(P<0.05).6 mmol·L-1二甲双胍组KG1a细胞中AKT、AMPKα、P70S6K、4EBP-1及p-P70S6K(Thr37/46)、p-4EBP-1(Thr389p)蛋白相对表达量显著低于2 mmol·L-1二甲双胍组(P<0.05),p-AMPKα(Thr172)、p-AKT(Ser473)蛋白相对表达量显著高于2 mmol·L-1二甲双胍组(P<0.05).结论 二甲双胍可抑制急性髓系白血病KG1a细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与二甲双胍调控AMPK信号通路有关.