核因子-κB对肝癌细胞多药耐药性的影响

摘要

目的 检测核因子-κB(NF-κB)在肝癌亲本株细胞及其耐药株细胞中的表达,探讨NF-κB对肝癌细胞多药耐药性的影响及其作用机制.方法 取对数生长期人肝癌亲本株细胞(Bel-7402和SMMC-7721),使用5 mg·L-1阿霉素(ADM)反复间歇冲击诱导,建立人肝癌细胞耐药株细胞(Bel-7402/ADM和SMMC-7721/ADM).将对数生长期Bel-7402、SMMC-7721、Bel-7402/ADM和SMMC-7721/ADM细胞分别随机分为阴性对照组和ADM、紫杉醇(PTX)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、长春新碱(VCR)、顺铂(CDDP)加药组,每组设15个复孔.加药组分别加入30μL各浓度梯度的化学治疗药物ADM(0.004、0.040、0.400、4.000、40.000 mg·L-1)、PTX(0.045、0.450、4.500、45.000、450.000 mg·L-1)、5-Fu(0.500、5.000、50.000、500.000、5000.000 mg·L-1)、VCR(0.005、0.050、0.500、5.000、50.000 mg·L-1)、CDDP(0.025、0.250、2.500、25.000、250.000 mg·L-1)处理,各浓度设3个复孔.阴性对照组加入等体积的磷酸盐缓冲溶液.同时设无细胞的空白组,只加入细胞培养基.另将对数生长期的耐药株细胞Bel-7402/ADM和SMMC-7721/ADM分别随机分为ADM组、VCR组、CDDP组、ADM+吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)组、VCR+PDTC组、CDDP+PDTC组.ADM组、VCR组、CDDP组细胞分别加入30μL各浓度梯度的ADM、VCR、CDDP.ADM+PDTC组、VCR+PDTC组、CDDP+PDTC组细胞先加50μL PDTC(10μmol·L-1)预处理1 h,再加入30μL各浓度梯度的ADM、VCR、CDDP.药物处理48 h后,采用腺苷三磷酸生物发光法检测各组细胞对化学治疗药物的半数抑制浓度.采用链霉菌亲和素-过氧化物酶连结免疫细胞化学染色法检测NF-κB在肿瘤细胞Bel-7402、SMMC-7721、Bel-7402/ADM和SMMC-7721/ADM的表达位置及表达量.提取Bel-7402、SMMC-7721、Bel-7402/ADM和SMMC-7721/ADM细胞蛋白,采用酶联免疫吸附试验检测NF-κB p65蛋白表达量.结果 Bel-7402/ADM和SMMC-7721/ADM细胞对ADM的耐药指数分别为21.2±1.4、16.2±1.0,符合中度耐药.Bel-7402/ADM和SMMC-7721/ADM细胞对PTX、5-Fu、VCR、CDDP均产生不同程度的耐药.ADM、PTX、5-Fu、VCR、CDDP加药组Bel-7402/ADM和SMMC-7721/ADM细胞的耐药指数均明显高于其亲本株细胞(P<0.05).ADM+PDTC组、VCR+PDTC组、CDDP+PDTC组Bel-7402/ADM和SMMC-7721/ADM细胞半数抑制浓度均显著低于相应ADM组、VCR组、CDDP组(P<0.05).NF-κB在Bel-7402、SMMC-7721、Bel-7402/ADM和SMMC-7721/ADM细胞的细胞质和细胞核中均有表达,其中亲本株细胞以细胞质表达为主,而耐药株细胞以细胞核表达为主,且Bel-7402/ADM和SMMC-7721/ADM细胞中NF-κB表达量均显著高于其亲本株细胞(P<0.05).Bel-7402/ADM和SMMC-7721/ADM细胞中NF-κB p65蛋白表达量显著高于亲本株细胞(P<0.05).结论 NF-κB对肝癌细胞多药耐药起促进作用,PDTC可在一定程度减少肝癌细胞的多药耐药性,NF-κB是调控肝癌细胞多药耐药的重要靶点.