乳腺癌帕博西尼耐药细胞株的建立及耐药机制研究

摘要

目的 建立人乳腺癌帕博西尼耐药细胞株T47D-PalR,分析研究其耐药机制.方法 采用抑制剂低浓度梯度递增法,建立人乳腺癌帕博西尼耐受的T47D-PalR体外耐药细胞模型;采用CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay(Promega)法检测T47D-PalR的耐药特性;采用实时荧光定量RT-PCR法与免疫蛋白印迹(Western-Blot)法分析T47D、T47D-PalR两种细胞相关耐药基因CDK2、CDK4、CDK6及CCND1、E2F1、Rb等的mRNA表达及蛋白表达水平.结果 经10个月的诱导成功建立T47D-PalR耐药细胞株,可在20μmol帕博西尼培养液中稳定生长.帕博西尼对亲本细胞T47D和耐药细胞T47D-PalR的IC50别为(0.069±0.018)μmol和(4.281±0.167)μmol,耐药指数(RI)为62;帕博西尼对T47D-PalR的单克隆细胞T47D-PalR-clone 39#的IC50>10μmol,耐药指数>144.9,属于高度耐药.与亲本细胞T47D比较,T47D-PalR细胞形态发生了明显改变,且T47D-PalR耐药细胞中CDK2、CDK4、CDK6、E2F1、CCND1等耐药基因的mRNA相对表达量均较T47D细胞升高,差异有统计学意义(P0.05);与母本细胞T47D比较,T47D-PalR耐药细胞中p-Rb、CDK4、CDK6、E2F1的蛋白表达均较T47D升高,差异有统计学意义(P0.05).结论 乳腺癌帕博西尼耐药细胞株对CDK4/6抑制剂帕博西尼具有稳定良好的耐药作用.