食管癌干细胞的分离、培养及鉴定

摘要

cqvip:目的以食管癌细胞株Eca109为实验材料,采用无血清法培养出球样细胞,在体外大量繁殖,运用多种方法鉴定其干细胞特性,为研究食管癌创造条件。方法在含10%小牛血清的细胞培养液中培养食管癌细胞株Eca109,传2～3代,后逐步降低细胞培养液中小牛血清的浓度,直至无血清,1周后收集悬浮生长的球样细胞,采用流式细胞仪分析细胞周期;免疫荧光法检测干细胞标记物亮氨酸丰富重复G蛋白偶联受体5重组蛋白(Lgr5)的表达;裸鼠致瘤实验检验球样细胞体内成瘤情况。结果 Eca109细胞在无血清培养液中培养1周,在上清液中收集少量悬浮生长的球样细胞,进行消化、传代,得到大量悬浮生长的球样细胞。比较Eca109细胞和球样细胞的细胞周期,Eca109细胞有(28.89±6.34)%处于分裂期,(52.12±4.53)%处于分裂前期;球样细胞有(6.48±2.35)%处于分裂期,(77.19±4.52)%处于分裂前期,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。Eca109细胞Lgr5表达率为(22.67±3.62),而球样细胞中Lgr5的表达率均为100%,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。裸小鼠成瘤实验发现,Eca109细胞无法在裸小鼠皮下成瘤,球样细胞只需2×10~4个即能成瘤,两者比较差异有统计学意义(P<0.05),且随着接种数目增多,瘤体体积也增大。结论逐步降低细胞培养液中小牛血清的浓度直至无血清条件,可驯化人食管癌细胞株Eca109繁殖出球样细胞,表现出肿瘤干细胞特性。