泡球蚴Em18抗原基因的分段表达及抗原表位的初步分析

摘要

目的 构建截短的泡球蚴18(Em18)基因的原核表达质粒,获得高效表达、有生物活性的重组蛋白并对其进行初步鉴定.方法 采用DNAman软件设计引物,聚合酶链式反应(PCR)法扩增并构建截短的pET41a-Em18.4原核表达质粒,测序鉴定插入序列正确性.异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导、表达和纯化rEm18.4-GST重组蛋白,采用SDS-PAGE电泳及蛋白免疫印迹法(Western blot)和酶联免疫吸附法(ELISA)检测对其进行初步鉴定.结果 成功构建出截短的pET41a-Em18.4,SDS-PAGE检测表明rEm18.4-GST重组蛋白得到成功表达,在相对分子量为41 KDa处有表达条带.但蛋白免疫印迹法(Western blot)和酶联免疫吸附法(ELISA)检测结果显示rEm18.4-GST重组蛋白不能与AE患者阳性血清反应.结论 成功构建出截短的pET41a-Em18.4原核表达质粒并表达的rEm18.4-GST重组蛋白,但其缺乏抗原性,可能与Em18的空间构象有关.