泡球蚴体外厌氧培养模型建立及影响体外培养泡球蚴生长发育因素研究

摘要

泡状棘球蚴病是由多房棘球绦虫续绦期幼虫引起的一种严重威胁着人类生命安全的人兽共患寄生虫病。然而多房棘球绦虫与宿主之间的相互作用关系以及免疫逃避的分子机制目前仍不清楚。一个主要原因是在实验室条件下培养寄生性蠕虫存在着很大困难,且很难获得足够的寄生虫材料进行分子水平上的研究。因此构建体外培养系统对泡球蚴的研究非常重要。
　　 本文建立了泡球蚴与HeLa细胞体外共培养系统:在含10％胎牛血清的DMEM中,HeLa细胞与泡球蚴共同培养。在泡球蚴共培养系统中,HeLa细胞分泌泡球蚴生长发育所需营养物质及维持泡球蚴生存所需的氧化还原平衡状态,泡球蚴因而能生长发育。然而在有氧条件下,宿主细胞的存在不利于进一步对泡球蚴研究,继而建立了泡球蚴体外厌氧培养体系:在厌氧条件下,在HeLa滋养细胞上清液中加入还原剂β-巯基乙醇、L-半胱氨酸及螯合剂2,9-二甲基-4,7-二苯基-1,10-菲啉磺酸二钠盐后,泡球蚴能生长发育。本论文研究发现:在厌氧培养体系中,培养液中胎牛血清维持泡球蚴的生存;HeLa滋养细胞分泌的营养物质促进泡球蚴生长发育;还原剂与螯合剂维持还原性环境,有助于稳定泡球蚴所需氧化还原平衡状态,其各自作用效果不同,β-巯基乙醇对促进泡球蚴生长发育效果最明显,其次L-半胱氨酸,2,9-二甲基-4,7-二苯基-1,10-菲啉磺酸二钠盐对泡球蚴生长略有促进作用,同时加入这三种泡球蚴生长发育最快;在厌氧环境下,能获得无宿主细胞的泡球蚴。通过泡球蚴体外厌氧培养体系将有助于深入分析特定宿主细胞分泌的生长因子对泡球蚴生长发育的作用以及进一步研究泡球蚴的生长发育及感染机制。