鸡白介素18成熟肽基因原核表达及抗血清的制备

摘要

用PCR技术从含鸡IL-18全长基因质粒扩增出编码鸡IL-18成熟蛋白基因,亚克隆于pPROEXTMHTa原核表达载体上,重组质粒转化大肠杆菌感受态DH5α中,随机筛选到阳性重组质粒,经酶切和测序证实目的基因正确克隆于表达载体.IPTG诱导,重组蛋白以包涵体形式表达.薄层扫描结果表明表达产物约占菌体总蛋白的21.95%,用Ni-NTA树脂纯化重组蛋白,免疫SPF鸡制备抗血清,Western blot结果显示鸡抗血清可以很好地和所表达的蛋白带特异结合.ELISA可以检测到较高的多克隆抗体效价,表明此蛋白具有良好的抗原性.