新吉细毛羊皮肤组织均一化全长cDNA文库的质量评价

摘要

通过对已构建新吉细毛羊皮肤组织的均一化全长cDNA文库进行活化,在此基础上进行EST生物信息学分析研究,期望能发现影响细毛羊羊毛性状的主效基因或相关基因.运用菌落PCR、菌液PCR、质粒快速鉴定3种方法对cDNA文库进行评价,通过测序,在NCBI上BLASTn搜索、比对及运用DNAstar等软件进行分析.初步鉴定的结果:cDNA文库的库容量(滴度)为1.57×106 pfu/mL,菌落PCR、菌液PCR阳性克隆的小片段率在80％～90％,克隆的片段大小在0.6～2.0 kb,cDNA在300～500 bp,而质粒快速鉴定的在90％,克隆的片段载体带大小3.5～5.0 kb.质粒快速鉴定的效果好于其他两种方法,耗时相对短,同时小片段率高；cDNA文库保存完好,符合基因文库的质量要求,有足够大的库容量来保证筛选目的基因.通过对筛选的阳性克隆5’端随机测序,随后获得可读序列169条,经过相关生物信息查询之后,发现其中可能含有完整基因.