宽缨酮减轻顺铂诱导的NRK-52E细胞损伤的作用研究

摘要

目的探讨宽缨酮(EN)对顺铂诱导的大鼠近端肾小管上皮细胞NRK-52E细胞损伤的作用,为宽缨酮防治顺铂所致急性肾损伤提供实验依据。方法体外培养NRK-52E细胞,随机分为对照组(Control)、顺铂组(Cisplatin)、宽缨酮干预组(EN+Cisplatin)。Annexin V-APC/7-ADD双染色结合流式细胞术检测细胞凋亡率;采用ATP检测试剂盒检测细胞ATP含量;采用MitoSOX荧光探针结合流式细胞术检测线粒体活性氧(ROS)改变;实时定量PCR检测细胞促炎因子(TNF-α、IL-6),PGC-1αmRNA的表达水平以及线粒体DNA(mtDNA)拷贝数的变化情况;Western blot检测细胞中促凋亡蛋白Cleaved Caspase-3和线粒体膜蛋白Tom20的表达水平。结果与对照组相比,顺铂组Cleaved Caspase-3的蛋白表达及细胞凋亡率均升高(P<0.05);TNF-α、IL-6的mRNA表达升高(P<0.05);ATP含量及mtDNA拷贝数降低,线粒体ROS含量增高,PGC-1α的mRNA表达及Tom20的蛋白表达均降低(P<0.05);与顺铂组相比,宽缨酮干预组细胞Cleaved Caspase-3的蛋白表达及细胞凋亡率均降低(P<0.05);TNF-α、IL-6的mRNA表达降低(P<0.05);ATP含量及mtDNA拷贝数增多,线粒体ROS含量降低,PGC-1α的mRNA表达及Tom20的蛋白表达均升高(P<0.05)。结论宽缨酮减轻顺铂诱导的NRK-52E细胞损伤,其机制可能与改善线粒体损伤、抑制细胞凋亡及炎症反应有关。